Квантитативно определување на гликоза во крвта со метод на глукоза оксидаза

Принципот на методот. Методот се заснова на специфичноста на дејството на ензимот на глукоза оксидаза. Овој ензим ја оксидира гликозата во присуство на молекуларен кислород за да формира глуконолактон, кој спонтано хидролизира до глуконска киселина. Гликозата оксидаза ја оксидира гликозата за да формира водороден пероксид (Н₂Ох₂), кој реагира со 4-аминоантипирин и фенол под дејство на пероксидаза. Како резултат, се формира розова боја соединение чија оптичка густина на 510 nm е пропорционална со концентрацијата на глукоза во примерокот.

гликоза + О₂ + Ч₂Ох → глуконска киселина + Н₂Ох₂

2 Н.₂Ох₂ + 4-аминоантипирин + фенол Хинонимин + 4H₂Ох

Опрема CPK, центрифуга, термостат, лавици, тест цевки, пипети, биолошки материјал, реагенси содржани во работниот раствор.

експериментален примерок, ml

стандарден примерок, ml

тест во мирување (N₂О), мл

Раствор за калибрација на глукоза (референца)

Цевките се инкубираат во термостат на 37 ° C за 15 минути, а потоа се обојуваат на ЦПЦ со зелен филтер во ковчиња со дебелина на слојот од 5 мм наспроти празен примерок (N₂О). Розовата боја е стабилна 1 час по инкубацијата.

Пресметка содржината на глукоза се произведува според формулата:

С =x C стандард каде

C е содржина на гликоза во експерименталниот примерок, mol / l,

Горе - оптичка густина на примерокот,

Јаде - оптичка густина на примерокот за калибрација,

Ц стандард - содржината во растворот за калибрација, mol / l.

Нормални вредности:  новороденчиња - 2,8-4,4 mmol / l

 деца - 3,9 -5,8 mmol / l

 возрасни - 3,9 - 6,2 mmol / l

Хипогликемија (GHC).Зголемувањето на гликозата во крвта се должи на многу причини, според кои се разликуваат две групи на хипергликемија.

1. Инсуларен - поврзан со недоволен инсулин во организмот или заради неефикасност на неговото дејство.

2. Вонсуларна (екстрасуларна) - не зависи од влијанието на инсулин.

Следниве процеси се најзначајни при формирањето на HHC: зголемено разложување на гликогенот, зголемена неоглугеноза, инхибиција на синтеза на гликоген, намалена искористеност на глукоза на ткиво под влијание на антагонисти на хормонални инсулини: соматотропин, глукортикоиди, тироксин, тиротропин.

Алиментарната хипергликемија се забележува со прекумерно внесување глукоза во крвта (на пример, хипергликемија со оптоварување со шеќер). „Хепатална“ хипергликемија се јавува кај дифузни лезии на црниот дроб.

Постојаната и тешка хипергликемија најчесто го придружува дијабетесот. Вообичаено е да се изолираат инсулин зависен дијабетес мелитус и не-инсулин-зависен дијабетес мелитус, или, соодветно, дијабетес мелитус тип I и дијабетес мелитус тип II. Формирањето на дијабетес тип I е поврзано пред се со нарушена синтеза и метаболизам на инсулин.

Втората група на хипергликемија е поврзана пред се со хиперфункција на ендокрините жлезди кои произведуваат хормони - антагонисти на инсулин. Забележано е во болести како што се синдромот Истенко-Кушингов и болест, акромегалија, тиреотоксикоза, фехохромоцитом, глукоганом. Нивото на гликоза во крвта се зголемува со одредени заболувања на црниот дроб (особено, кај 10-30% од пациентите со цироза на црниот дроб), хемохроматоза (пигментирана цироза на црниот дроб, бронзен дијабетес).

Хипогликемија (GPG) - намалување на гликозата во крвта - најчесто поврзано со апсолутно или релативно зголемување на нивото на инсулин во крвта. Екстрапанкреативната хипогликемија е забележана како резултат на нерамнотежа помеѓу сериозноста на процесите на гликогенолиза и гликонеонеза во црниот дроб кај акутен и хроничен хепатитис, цироза, акутна и субакутна црнодробна дистрофија, интоксикација со алкохол, труење со арсен, фосфор, со продолжена опструктивна жолтица, црниот дроб . Намалување на концентрацијата на гликоза во крвта често се забележува кај пациенти кои страдаат од карцином на хранопроводникот и други малигни тумори на вон-панкреасна локализација (фиброма, фибросарком, неврома), како и со неизбришливо повраќање, анорексија, хепатален дијабетес, уремија, профузна лактација и глукозурија кај бремени жени.

Хипогликемијата може да биде од централно потекло заради ментална траума, енцефалитис, субарахноидна хеморагија, тумор на мозокот.

1. Наследни нарушувања на варењето на јаглени хидрати.

2. Кои видови хиперглукоземија ви се познати?

3. Кои се причините за патолошката хиперглукоземија?

4. Која е причината за инсулин-зависен дијабетес мелитус?

5. Кои се биохемиските причини за наследни заболувања: а) гликогеноза? б) агликогеноза? в) фруктосемија? г) галактоземија?

6. Кои се биохемиските промени во метаболизмот на јаглени хидрати за време на постот?

7. Принципот на методот за утврдување толеранција на гликоза.

Кога е пропишан методот на глукоза оксидаза?

Овој тест се користи за откривање на нарушена толеранција на шеќер и развој на предјабетес, како и во висина на болеста. Но, за вакви цели, анализата ретко се користи, тоа се должи на високата цена и долго очекување на резултат. Најчесто, определувањето на гликозата во крвта и урината со помош на овој метод се користи во диференцијалната дијагноза на болести како што се:

Шеќерот се намалува веднаш! Дијабетесот со текот на времето може да доведе до еден куп болести, како што се проблеми со видот, состојби на кожата и косата, чиреви, гангрена, па дури и карцинозни тумори! Луѓето научија горчливо искуство за нормализирање на нивото на шеќер. читај натаму

синдром на нетолеранција на лактоза,
нетолеранција на фруктоза,
секреција на фруктоза со телесни течности,
зголемена концентрација на пентоза во урината.

Несомнената предност на тестот за глукоза оксидаза е неговата точност.

Која е основата на овој метод?

Постојат различни методи за утврдување на концентрацијата на глукоза во крвта, но глукозата оксидаза е најточна. Се заснова на фактот дека за време на интеракцијата на шеќерот со атмосферскиот кислород, реагенсот се оксидира. Водород пероксид се ослободува во растворот. Оваа супстанција комуницира со ортотолуидин за да формира обоено соединение. За однесувањето на оваа реакција, неопходно е присуство на специјални ензими. За време на реакцијата на оксидација, глукозата оксидаза мора да биде присутна, а при боење на течноста, мора да биде присутна пероксидаза. Интензитетот на боја на растворот ќе зависи од содржината на гликоза и ќе биде најинтензивен по неговата висока содржина.

Суштината на определување на глукоза оксидаза на глукоза

Евалуацијата на резултатот се случува со употреба на квантитативниот метод на фотометрија по истиот период на време. Задолжително е да користите раствор за калибрација, кој содржи одредена декларирана норма на шеќер и, почнувајќи од него, можете да процените концентрација на гликоза во телесните течности, честопати во крвта.

Како се спроведува анализата?

Материјалот се зема од пациентот на празен стомак. За тестот, венска крв се користи во количина од 5 ml. Во пресрет на дијагнозата, на пациентот му се покажува строга диета. Ова ќе овозможи да се суди за веродостојноста на резултатот и да се исклучат можните грешки во анализата. 2 дена пред земање на крв, пациентот треба да се откаже од лошите навики на пиење алкохол и пушење. Исто така, неопходно е да се ограничи внесот на премногу слатка храна и да се избегнат стресни ситуации секогаш кога е можно.

За да се добие плазма со шеќер, крвта се центрифугира.

Најчесто, овој метод за одредување на концентрацијата на глукоза се изведува со центрифугирање, кои елементи на форма се изолирани. Количината на шеќер е веќе одредена во плазмата. Кога ќе се додадат сите потребни реагенси, бојата се забележува по 20 минути ако тестот се изведува на собна температура. Пресметувањето на гликозата се врши според распоредот за калибрација или со употреба на правилото на порции.

Реагенси за истражување

За да се утврди шеќер, најзгодно е да се користат експресни методи за одредување на гликоза во крвта. Ова се должи на лесната употреба и брзи резултати. Покрај тоа, пациентот не треба да оди во лабораторија или болница. Но, за разлика од тестот за глукоза оксидаза, таквата дијагноза е несигурна. Бидејќи не ја разликува гликозата од другите шеќери и ја одредува нивната концентрација заедно.

Основата на реакцијата на глукоза оксидаза е раствор на натриум хлорид 9% и цинк сулфат 50%. Тие се додаваат во фаза на центрифугирање на крв. Покрај тоа, се користи тампон раствор со оцетна киселина и натриум ацетат. Методот на титрација ја одредува неговата pH вредност на 4,8. После тоа, се додава гликоза оксидаза, поради што се ослободуваат водород пероксид и пероксидаза, што учествува во боење на растворот до саканата концентрација за да се добие точен резултат.

Норми во анализата

Мерењето на шеќерот се одвива во специјални единици - милимоли на литар раствор.

Тест на крвта на глукоза оксидаза мора да помине на празен стомак и за ова да користи плазма или серум. Нормата на нејзината количина за возрасни и за жени и за мажи е 3,3-5,5. За деца под 15 години, оваа бројка е малку пониска и се движи од 3.2-5.3. Кај новороденчиња, гликозата во крвта е 1,7-4,2. Зголемување на показателите е забележано со развој на пациент со дијабетес мелитус или нарушена толеранција на гликоза. Оваа состојба е предјабетес и доколку остане не лекувана навреме, наскоро ќе доведе до развој на оваа тешка патологија.

Дали сè уште изгледа невозможно да се излечи дијабетесот?

Судејќи според фактот дека сега ги читате овие редови, победа во борбата против високиот шеќер во крвта сè уште не е на ваша страна.

И веќе сте размислувале за болничко лекување? Разбирливо е, бидејќи дијабетесот е многу опасна болест, која, доколку не се лекува, може да резултира со смрт. Постојана жед, брзо мокрење, заматен вид. Сите овие симптоми ви се познати од прва рака.

Но, дали е можно да се третира причината, а не ефектот? Препорачуваме да прочитате напис за тековните третмани со дијабетес. Прочитајте ја статијата >>